Doktorants skaita sunas 3 stundas. MI saskaita tos pasus preparatus 90 sekundes, un tas nepretrunaa pats sev starp otrdienu un piektdienu.
Sunu skaitisana ir viens no visbiizaak atkartotajiem uzdevumiem biologija, farmakologijaa un mediciniskajos petijumos. Katrs sunu kulturas eksperiments, zalu devaa petijums un dzivotspeejas tests sakas ar to pasu jautajumu: cik suunu ir saja paraugaa? Tradicionala atbilde ietver hemocitometru, mikroskopu un daudz pacietibas. MI skaitisanas riki tagad sniedz rezultatus sekundes ar labaaku konsekvenci neka pat pieredzejuusi operatori.
Manualas skaitisanas rutina
Manuala sunu skaitisana ar hemocitometru seko ritualaam, kas gandrizzz nav mainijies gadsimtu. Ievietojiet paraugu uz skaitisanas kameras. Uzlieciet segstiiklu. Iestatiet mikroskopu. Saskaitiet cetrus stuuraa kvadrantus. Apreekiniet videejo. Reiziniet ar atskaidisanas koeficientu. Pieerakstiet skaitli. Atkartojiet ar naakamo paraugu.
Viens paraugs aiznem 10-15 minutes pieredzejusam tehnikkim. Tipiska sunu kulturas diena var ietvert 10-30 paraugus, un eksperimenti, kam nepieciesama laika gaitas uzraudziba, to reizina pa stundam vai dienam. Matematika atri uzkrajas: petijumu grupa, kas veic vairakus testus, var viegli pavadit 20-30 stundas nedela tikai skaitot.
Lielaaka problema nav laiks, bet mainigums. Petijumi raada, ka hemocitometra skaitisanas starpoperatoru variacija var sasniegt pat 52%, un pat viens operators rada lidz 20% variaaciju starp atkartotam ta pasa parauga skaitisanam. Kameras ielades kludas veido aptuveni 4,6%, pipetesana pievieno vel 4,7%, un pat segstiikla novietojums rada 7,6% atskiribu. Apkopojot sus kldudu avotus, lai sasniegtu labaaku par 15% variacijas koeficientu, jaaskaita simtiem sunu vairakaaas kameraas.
Ka darbojas MI sunu skaitisana
MI sunu skaitisana sakas ar to pasu ievadi: mikroskopa attelu. Atskiriiba ir taa, kas notiek talak. Cilveeka vietaa, kas sasprindzinati skataaas uz kvadrantiem, datorredzes modelis segmente attelu, identifice atseviskas sunas un atgriez skaitu ar uzticamiibas markeriem, parasti mazaak neka 30 sekundes uz vienu attelu.
Tadi riki ka SnapCyte darbojas tiesii ar standarta hemocitometra atteliem, kas uznemti ar 10X palielinajumu caur mikroskopa kameru vai pat viedtalruna adapteri. MI automatiski atpazist rezga linijas, identifece sunas skaitisanas apgabalos un apreekina koncentraciju un dzivotspeeju. Tas atbalsta Neubauer, Improved Neubauer un Burker kameru tipus bez manualas konfiguuuraacijas.
Adherentam sunam kulturas plaatnees MI uzlabota mikroskopija izmanto fazes kontrasta vai fluorescences atteelveidosanu, lai detektetu sunas tiesi traukaa. Bez tripsinizacijas, bez parauga parnesanas, bez hemocitometra. Sunas paliek netraucetas sava augssanas videe.
Precizitate un reproducejamiba
MI sunu skaitisana sasniedz mazaaku neka 6,26% videejo absoluto procentualo kludu dzivu un miruso sunu maisijumiem, kas ir butisski labaak neka manualas hemocitometra skaitisanas 15-52% variacijas diapazons. Vel svarigak, MI rada to pasu rezultatu katru reizi, kad apstrada to pasu attelu.
Reproducejamiba ir istaa priekssrociba. Zalu skriningaa 20% variaacija bazliniijas sunu skaita kaskade caur katru nakamo apreekinu: IC50 vertibas nobrazinaas, devas-atbildes liknes svarstas, un eksperimentiem nepieciesami vairak atkartojumu, lai sasniegtu statistisko nozimigumu. Konsekventa skaitisana sakumaa saprina katru nakamo rezultatu.
10-15 minutes uz vienu paraugu. Variacijas koeficients: 5-15% pieredzejusiem lietotajiem, lidz 52% starp operatoriem. Rezultati ir atkariigi no ta, kas skaita un kad.
Mazak neka 30 sekundes uz vienu attelu. Gandriz nulles starpoperatoru variacija. Tas pats attels, tas pats skaitlis, katru reizi.
Sunu tipi, kas labi darbojas
MI skaitisana tiek gala ar plasu sunu tipu un preparatu klaastu.
- Suspensijas sunas (CHO, Jurkat, PBMC): vienkarsa detekcija ar tripana zila dzivotspeejas krasosanu
- Adherentas sunas kultura: fazes kontrasta atteelveidosana skaita sunas, tas nenonemot no plaatnes
- Asins sunas: balto asins sunuu diferenciali un trombocitu skaiti no iekrasotiem iztrieepeem
- Bakteriju kolonijas: skaitiet KVV uz agara plaatneem no viena fotoattela
- Raugu sunas: pumpurojoso un nepumpurojoso diferenciaacija aludaribas un biotehnologijas pielietojumiem
Galvenas problemas ir stipri parklajosss sunu kopas, blivas grusuu zonas un loti mazas sunas, kas ir zem mikroskopa objektiva izskirtspejas robezas. Lielaakai dalai standarta sunu kulturas darbu ar 10X-20X palielinajumu MI skaitisana jau ir gatava razosanai.
Ka sakt bez jaunas aparaturas
Iejas barjera ir zemaka neka lielaka dala petnieku sagaida. MI sunu skaitisanas riki darbojas ar esosajiem mikroskopu komplektiem, nav nepieciesams specializets automatiskais skaitītajs. Pietiek ar standarta laboratorijas mikroskopu ar kameras papildinajumu. Dazi riki pat darbojas ar viedtalruna atteliem, kas uznemti caur okularu.
Laboratorijam, kas jau izmanto hemocitometrus, pareja ir tuleeteeja: uznemiet attelu, ko parasti skaititu ar acim, augsuplaadejiet to un iegustiet skaitu ar uzticamibas parklajumu. Hemocitometrs paliek, skaitisana ar acim pazust.
Gala secinajums
Sunu skaitisana ir bijusi manuals, subjektivs sauruums petijumu laboratorijas vairak neka gadsimtu. MI nemaina biologiju - tas maina laiku, konsekvenci un skaitisanas uzticamibu. Mazak neka 30 sekundes 15 minuusu vieta. Mazaak neka 6% kluda 15-52% mainiguma vieta. Tas pats rezultats otrdiena un piektdiena.
Nakamreiz, kad sunu kulturas eksperiments sakas ar 30 minutu hemocitometra skaitisanu, meginiet nofotografet kameru. Skaits bus gatavs pirms inkubatora durvis aizveras.